Сельскохозяйственная биотехнология-стр.248

Клонирование эмбрионов путем пересадки ядра включает три основных этапа: выделение интактного ядра донора, энуклеацию ооцита, пересадку ядра в энуклеированную яйцеклетку. В отличие от амфибий пересадка ядра у млекопитающих не стимулирует ооцит. Поэтому требуется четвертый этап - активация ооцита и слияние мембран яйца и ооцита. Под действием электрического импульса происходят активация ооцита и слияние мембран между ядром клетки донора и энуклеирован-ным ооцитом-реципиентом. Технология пересадки ядер клеток способствовала успешному получению клонированных живых кроликов, мышей, овец, коз, крупного рогатого скота и свиней. Было показано, что только эмбрионы на предимплантационной стадии являются тотипотентными, но эффективность этой технологии пока низка. У крупного рогатого скота была продемонстрирована следующая эффективность этой технологии на каждом этапе (%): энуклеация - 70-80, развитие морулы-бласто-цисты клонированных эмбрионов - 20-30 и выживаемость до получения потомства - 20-30. В исследованиях К.Р. Вондиоли (1991) 190 эмбрионов с пересаженными ядрами были получены из одного эмбриона путем многократной пересадки ядер из последовательно клонированных эмбрионов. Однако последовательные пересадки ядер после четвертого цикла сопровождались высокими эмбриональными потерями в матке. В итоге не удалось получить телят от пересадки эмбрионов, полученных после третьего цикла клонирования.

При использовании в качестве доноров ядер более продвиг-нутых в развитии эмбрионов крупного рогатого скота 6-дневно-го возраста (47-68 бластомеров), по сравнению с использованием малоклеточных эмбрионов (около 30 бластомеров), достигается более высокая эффективность слияния бластомера и ооцита, дробления эмбрионов и развития до стадии бластоцисты (В.И. Захарченко и др., 1996). Число клонированных бластоцист, полученных от эмбрионов одного и того же возраста, более продвигнутых в развитии, значительно выше, чем от менее продвигнутых. Эффективность развития клонированных эмбрионов крупного рогатого скота выше при использовании в качестве источника бластомеров морул на стадии прекавита-ции. При этом свежевымытые морулы являются лучшими донорами ядер, чем развившиеся in vitro.

Другие материалы

Технология спирта-стр.187

Способ основан на проведении процесса фильтрации через ряд полупроницаемых мембран, в результате чего ферменты и другие высокомолекулярные вещества задерживаются или выводятся из аппарата в виде ультраконцентрата (концентрированного сиропа). Вода и часть низкомолекулярных веществ' (пермеат) проходят через мембраны и также удаляются.