Сельскохозяйственная биотехнология-стр.237

Разработано несколько методов капацитации эякулированных спермиев домашних животных. Для удаления белков с поверхности спермиев, которые, по-видимому, тормозят капацита-цию спермиев, была использована среда с высокой ионной силой.

Однако наибольшее признание получил способ капацитации сперматозоидов с использованием гепарина (Дж. Парриш и др., 1985). Пайеты с замороженным семенем быка оттаивают в водяной бане при 39° С в течение 30-40 с. Примерно 250 мкл оттаянного семени подслаивают под 1 мл среды для капацитации. Среда для капацитации состоит из модифицированной среды Тиройда, без ионов кальция. После инкубации в течение одного часа верхний слой среды объемом 0,5-0,8 мл, содержащий большинство подвижных сперматозоидов, удаляют из пробирки и промывают дважды центрифугированием при 500 g в течение 7-10 мин. После 15 мин инкубации с гепарином (200 мкг/мл) суспензию разбавляют до концентрации 50 миллионов сперматозоидов в мл.

В Биотехцентре (Н.М. Сураева) было показано, что концентрация спермиев при всплывании стабилизируется уже в первые 5 мин и не меняется в течение последующего часа (табл. 4.5).

Т а б л н ц а 4.5. Эффективность всплывания спермиев в зависимости от продолжительности инкубации

Продолжительность инкубации, мии

Число опытов

Число спермиев в 1 мл

5

5

(3,3+0,46)-106

15

6

(3,8+0,53)-106

30

5

(1+0,75)-106

45

5

(2,8+0,72)-10ь

60

6

(3,0±0,4I )• 106

Таким образом, согласно данным табл. 4.5, можно значительно сократить продолжительность всплывания с 45-60 до 5-15 мин, что, в свою очередь, ускоряет, а значит, и облегчает оплодотворение. Поскольку желточный растворитель, содержащийся в сперме, оказывает токсическое действие на яйцеклетки и снижает эффективность оплодотворения, то чем меньше будет контакт с разбавителем, тем меньше его растворится в среде со всплывшими спермиями. Мы предлагаем уменьшить время ин кубации до 5-15 мин. Однако может встать вопрос о том, что сокращение продолжительности всплывания, а значит, и капа-цитации спермы может негативно повлиять на оплодотворяющую способность спермиев. Были проведены опыты по оплодотворению вне организма яйцеклеток крупного рогатого скота спермой, подвергшейся процедуре всплывания в течение 15 и 60 мин. Эксперименты с использованием двух интервалов инкубации показали, что продолжительность инкубации не влияет на эффективность дробления оплодотворенных вне организма яйцеклеток крупного рогатого скота (табл. 4.6).

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.1005

В такой форме электрический ток поступает на пивоваренные предприятия через один или несколько трансформаторов» которые напитываются напряжением 10 или 20 кВ; их пониженное выходное напряжение составляет 380 В. В других странах зачастую используется другое напряжение - например, используется трехфазный ток напряжением 660 В.

Это напряжение можно снимать в виде трехфазного тока или же только с одной фазы в форме переменного тока напряжением 220 В.