Сельскохозяйственная биотехнология-стр.228

Выявление этих факторов привело к упрощению процедуры замораживания и оттаивания эмбрионов крупного рогатого скота. В частности, оттаивание эмбрионов, как и спермы проводят в теплой воде при 35° С в течение 20 с непосредственно перед пересадкой без применения специального оборудования с заданной скоростью повышения температуры.

В последние годы установлено, что замороженные и оттаявшие эмбрионы могут быть успешно разбавлены одноступенчато в пайете, где они были заморожены. Сущность метода состоит в следующем. Замороженно-оттаянные эмбрионы переносят одноступенчато из раствора криопротектора, в частности 1,5 М глицерина в фосфатном буфере, в котором они были заморожены, в среду, содержащую гипертонический раствор не проникающего в клетку соединения, каким является сахароза. Это обеспечивает постепенное удаление криопротектора из эмбриона без нарушения осмотического равновесия в 0,02 мл 1,5 М глицерина.

С помощью воздушных пузырьков пайету делят на три камеры; в первой-раствор криопротектора; во второй - эмбрион в растворе криопротектора; в третьей-растворитель (1,08 М раствор сахарозы). После замораживания и оттаивания содержимое пайеты перемешивают встряхиванием. Затем эмбрион может быть пересажен из пайеты нехирургическим способом реципиенту. Этот метод позволяет пересаживать замороженно-оттаянные эмбрионы по типу искусственного осеменения. Сравнение методов одноступенчатого и многоступенчатого оттаивания эмбрионов показало, что оба они дают одинаковые результаты.

Успешное замораживание и оттаивание эмбрионов овец впервые было проведено С. Вилладсен и др. (1974). Эмбрионы медленно охлаждали (от 0,3 до 2,0° С/мин) и медленно оттаивали (от 4 до 25° С/мин). В качестве криопротектора применяли ДМСО. Позднее установлено, что при использовании 1,5 М ДМСО в фосфатном буфере замораживание со скоростью 1° С/мин до -120° С сопровождалось выживаемостью эмбрионов только в том случае, если применялось быстрое оттаивание (360° С/мин). Однако при замораживании со скоростью 0,3° С/мин была сохранена выживаемость эмбрионов как при быстром, так и при медленном оттаивании (10 или 4° С/мин). При дальнейшем уменьшении скорости замораживания до 0,1° С/мин в интервале температур между -30 и -60°С медленное оттаивание было обязательным.

Другие материалы

Питьевое молоко и сливки

Питьевое молоко. Согласно физиологической норме, из молочных продуктов человек должен потреблять 50 % в виде питьевого молока. Предполагают, что в технологии производства питьевого молока в перспективе будут происходить глубокие изменения, в первую очередь связанные со сроками хранения, которые надо продлить до 30— 40 дней. Для этого планируют более широко использовать ультравысокотемпературную обработку молока (стерилизацию) и расфасовку его в асептических условиях.