Сельскохозяйственная биотехнология-стр.210

Кроме того, в состав вектора должен входить ген-маркер, по которому будет вестись селекция. В наиболее часто используемых конструкциях таким маркерным геном является ген KmR, определяющий устойчивость к антибиотику канамицину. Наличие маркерного гена необходимо для того, чтобы на ранних стадиях можно было отобрать только те растения, в геном которых был интегрирован вектор, так как невозможно отличить на стадии каллуса или ранних этапов регенерации трансформированные растения от нетрансформированных. Если трансформацию проводят с помощью агробактерии, то выбираются векторные системы на основе Ti-плазмиды и интересующий нас ген вместе с геном-маркером встраивается в область Т-ДНК.

Таким образом, в Т-ДНК область вектора входит модифицированная последовательность гена а-зеина с промоторной областью, маркерный ген KmR, определяющий устойчивость к канамицину, и повторы правой и левой границы, фланкирующие Т-ДНК. Векторную конструкцию вводят в клетки агробактерии.

Трансформация растительных клеток табака происходит при кокультивировании фрагментов листа табака и агробактерии, в результате чего происходит встраивание векторной конструкции с модифицированным геном зеина в отдельные клетки мезофила листа. Затем фрагменты листьев табака переносятся на среду для регенерации. Введение в состав среды для регенерации растений-трансформантов антибиотика канамици-на приводит к выживанию только тех растений, геном которых содержит векторную последовательность модифицированного гена запасного белка и гена-маркера. Полученные растения-трансформанты, отобранные на селективной среде с антибиотиком, анализируют на присутствие векторной конструкции методом блот-гибридизации и определяют уровень экспрессии модифицированного белка.

Другие материалы

Консерванты в пищевой промышленности-стр.87

Хроническая токсичность. Скармливание трём поколениям крыс по 100 мг нитритов на 1 кг массы тела приводит к снижению концентрации гемоглобина в крови и уменьшению продолжительности жизни (статистически недостоверному). Способность к продолжению рода у крыс при этой дозе нитритов не ухудшается 1181. Добавление в питьевую воду морским свинкам от 5 до 10 г нитритов на 1 л (что соответствует 120-290 мг на 1 кг массы тела) в течение 4 месяцев не приводит к макроскопическим изменениям (кроме состава крови); однако наблюдается значительное снижение репродуктивной способности |19|.