Сельскохозяйственная биотехнология-стр.199

Другой распространенный метод введения чужеродной генетической информации заключается в использовании бинарных векторов.

Оказалось, что для заражения и трансформации растительных клеток агробактериями необходима vir-область, ответственная за перенос ДНК и прямые повторы, ограничивающие Т-район. Более того, vir-область и ДНК, содержащая на концах пограничные повторы Т-района, могут находиться в разных плазмидах. Бактерии, содержащие Ti-плазмиду с vir-областью и другую плазмиду, в которой в Т-ДНК встроены любые гены, обеспечивают интеграцию последней в геном растения. Гомологичная рекомбинация для этого не требуется.

Однако полученные клетки не будут способны к регенерации, поскольку в них подавлена дифференцировка. Если же в гены, блокирующие дифференцировку, ввести мутации или вырезать их из Т-ДНК, трансформированные клетки обретут способность к регенерации. Так, ген алкогольдигидрогеназы (АДГ) дрожжей был встроен в область клонированной Т-ДНК, ответственную за подавление дифференцировки. Этой Т-ДНК трансформировали клетки табака, из которых затем удалось регенерировать целые растения, содержащие в геноме многочисленные копии АДГ - Т-ДНК- Растения были фертильными и в клетках потомства также содержались копии химерной ДНК (рис. 3.20).

В общем случае для конструирования безвредного (для регенерации) вектора из Т-ДНК нужно удалить все ее собственные гены, оставив сигнальные прямые повторы и чужеродную

Рис, 3.19. Использование Ti-плазмиды в качестве вектора для переноса геиов в растительные клетки

ДНК- Для того чтобы эта ДНК экспрессировалась в растительных клетках, конструируют составной ген, в котором регуляторная область с промотором взята от одного из генов Т-области (например, гена нопалинсинтетазы, ответственного за синтез нопалина), а структурная часть представлена структурной частью гена, который нужно ввести в растение. Показано, что такие составные гены, будучи интегрированными в геном растения, хорошо экспрессируются под контролем нового промотора. Таким образом, проблема экспрессии генов в трансформированных растениях в принципе решена.

Другие материалы

Микробиологические основы технологии шампанизации вина-стр.33

При изучении влияния продуктов метаболизма штамма-убийцы на физиологическую активность чувствительных и нейтральных штаммов установлено, что активность дыхания и брожения чувствительных штаммов резко снижается при использовании в качестве субстрата шампанизированного вина, сбродившего на Таблица 4

Стадии технологического процесса

Фенотип, %

S

N

К

Виноматериал необработанный

67

33