Сельскохозяйственная биотехнология-стр.198

Рис. 3J8, Структура Ti-плазмид;

/ - область вирулентности; 2 - морфология опухоли; 3-синтез октопина или нопалина; 4 - распад нопалина; 5-распад агро-цинопина; 6-распад агролина интеграцию Т-ДНК, находятся не в Т-ДНК, а в области вирулентности (vir-область) (рис. 3.18).

Уникальные биологические свойства Ti-плазмиды делают его идеальным вектором, естественным агентом для переноса генов. Она имеет широкий круг хозяев, встраивает ДНК в состав хромосомы, где она реплицируется и большая ее часть транслируется с образованием белка. Существенно также, что границы Т-ДНК обозначены прямыми повторяющимися последовательностями длиной 25 нуклеотидных пар, и любая ДНК, вставленная между этими повторами, будет принята за Т-ДНК и перенесена в растительную клетку. Поскольку гены в составе К-ДНК имеют промоторы, то под их контроль можно поставить чужеродные гены. Однако из-за больших размеров манипуляции с Ti-плазмидой затруднены, вставить ген в плазмиду традиционными методами не представляется возможным.

Промежуточный и бинарный векторы. Один из способов введения чужеродной ДНК заключается в использовании промежуточного вектора. Смысл подхода состоит в следующем (рис. 3.19). Сначала Т-ДНК с помощью рестриктаз вырезают из плазмиды и вставляют в вектор для клонирования в Е. coli (например, pBR 322). Плазмиду с Т-ДНК размножают и, используя стандартные методы, встраивают чужеродный ген внутрь Т-области и вновь размножают с уже вставленным геном. Затем полученную рекомбинантную плазмиду вводят в клетки A. tumefacience, несущие полную Ti-плазмиду. В результате двойного кроссинговера (гомологичной рекомбинации) между гомологичными районами Т-ДНК часть рекомбинантной плазмиды, которая содержит чужеродный ген, включится в Ti-плазмиду, заместив в ней нормальную Т-ДНК- Наконец, бактериями, имеющими Ti-плазмиду со встроенными генами, заражают растения и в результате получают клетки корончатого галла, которые будут содержать Т-область со встроенным в нее чужеродным геном.

Другие материалы

Сельскохозяйственная биотехнология-стр.364

Каллусообразование происходит в растительном мире довольно широко. Открытые раны растений способны достаточно быстро затянуться каллусной тканью, которая впоследствии дифференцируется. В подавляющем большинстве каллус образуется из меристематической ткани, главным образом камбия. При этом не возникает необходимость в модификации клеточной структуры.