Сельскохозяйственная биотехнология-стр.189

С помощью челночного гена удалось ввести гены лейкоцитарного интерферона человека в клетки дрожжей. Уже сконструирован штамм дрожжей, который выделяет в культуральную среду почти чистые а-, Р- и у-интерфероны. Для биологической активности интерферонов, которые представляют собой глико-протеины, существенно наличие углеводных групп. Клетки дрожжей, подобно клеткам млекопитающих, способны синтезировать такие группы и присоединять их к белковым молекулам. Бактериальные клетки таким свойством не обладают. Таким образом экспрессия генов млекопитающих значительно облегчает получение функционально активного продукта.

3.5. ВВЕДЕНИЕ ГЕНОВ В КЛЕТКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Один из наиболее эффективных методов введения чужеродного гена млекопитающего состоит в том, что этот ген, предварительно клонированный в бактериальных клетках, переносят не в микроорганизмы, а в клетки млекопитающего, растущие е культуре. Хотя культуры клеток животных, особенно при мае-совом выращивании, гораздо менее экономичны, чем бактериальные дрожжевые культуры, они обладают существенным преимуществом - способностью осуществлять мелкие, но весьма важные модификации белков - продуктов гена млекопитающих. Например, для эффективного функционирования ряда белков необходимо присоединение к ним цепочек из молекул углеводов или липидов. Образование и присоединение таких цепочек - обычный процесс для клеток млекопитающих, тогда как бактериальная клетка не способна производить подобные модификации.

Трансфекция. Эффективной трансформации клеток млекопитающих очищенной ДНК удалось достичь при добавлении к трансформирующей ДНК ионов Са. Предполагают, что клетки преимущественно поглощают частицы кальциевого преципитата ДНК по механизму фагоцитоза, а затем небольшая часть проникших в клетку молекул стабильно интегрирует с хромосомой ДНК- Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, необходима разработка метода маркера. Был разработан метод получения клеток, дефектных по гену тимидинкиназы (тк-клетки). При трансформации таких клеток ДНК, содержащей ген тимидинкиназы вируса герпеса, с частотой 1 на 10 (10) клетки приобретали ген тк и могли расти на селективной среде. Анализ методом блот-гибридизации (см. с. 180) подтвердил, что выжившие клетки содержали интегрировавший в геном тк-ген вируса герпеса.

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.136

2.1.4.2.2. Пылеотделительный фильтр новой конструкции Такие фильтры в настоящее время конструируют в виде форсуночных фильтров и ряда других их 'видов, размещаемых на небольших площадях и применяемых для очистки воздуха в соответствии с требованиями законодательства об охране окружающей среды.

2.1.4.2.2.1. Рукавный фильтр Рукавный фильтр с пневматической очисткой (рис. 2.31, 2.32) состоит из цилиндрической и конической частей. В цилиндрической части размещены рукава из натянутого на проволочный каркас синтетического войлока дли-