Сельскохозяйственная биотехнология-стр.187

Клонирование и экспрессия генов в бациллах и дрожжах. Успешное проведение генно-инженерных экспериментов на кишечной палочке - естественном обитателе кишечного тракта человека - стало стимулом для проведения аналогичных исследований с различными про- и эукариотическими организмами. Наибольших успехов в технологии рекомбинантных ДНК удалось достигнуть с клетками хорошо изученных организмов Bacillus subtilis и Saccharomyces cerevisiae.

В. subtilis - непатогенный почвенный микроорганизм, который растет строго при аэробных условиях. Бациллы не образуют токсинов и не патогенны ни для животных, ни для растений, тогда как клеточная стенка Е. coli содержит эндотоксин - ли-полисахарид, который довольно трудно отделить от веществ - продуктов генной инженерии. Кроме того, клеточная стенка бацилл имеет простую структуру, и бактерии могут сек-ретировать многие белки в культуральную жидкость. Так, 20 различных видов бацилл синтезируют в общей сложности более 40 ферментов с внеклеточной локализацией. Е. coli по сравнению с бациллами секретирует в среду относительно мало белков, что существенно затрудняет их выделение и очистку. В бациллах обнаружены плазмиды и фаги, генетика которых хорошо изучена. Клонирование осуществляется с помощью так называемых челночных векторов. Эти векторы способны реплицироваться в клетках нескольких хозяев, в данном случае-в В. subtilis ив Е. coli. Векторы были получены комбинацией in vitro фрагментов плазмид В. aureus, Е. coli и хромосомных фрагментов бацилл. Существует, однако, проблема экспрессии чужеродной ДНК. Дело в том, что гены Е. coli со своими регуляторными районами не функционируют в В. subtilis, и для преодоления этого барьера необходимо использовать собственные (гомологичные) регуляторные районы. Таким образом в Е. coli были проклонированы гены trp-onepoHa, преинсулина, антигенов гепатита В, ящура и их белковые продукты синтезировались в В. subtilis. Дрожжи Saccaharomyces cerevisiae принадлежат к эукариотическим организмам, и организация их генетического аппарата гораздо сложнее, чем у Е. coli и В. subtilis. Этот вид наиболее полно исследован с генетической точки зрения. В гаплоидных клетках содержится 17 хромосом. Однако размер генома невелик, всего в четыре раза больше, чем у Е. coll. В составе хромосом идентифицировано несколько сотен генов. Большинство штаммов дрожжей содержат автономно реплицирующуюся кольцевую ДНК длиной два микрона (так называемое 2 мкм-кольцо). Эта дрожжевая плазмида содержит примерно 6300 пар оснований и имеет примерно 50-100 копий на клетку.

Другие материалы

Технология производства продукции общественного питания-стр.765

Утка с маслинами. Утку моют, вырезают из нее как можно больше внутреннего жира, затем натирают солью, перцем, кладут на решетку и помещают в сильно разогретый духовой шкаф на 45 мин, подставив под решетку противень. Периодически утку переворачивают. Вытопившийся жир сливают, утку кладут на противень, вливают вино, добавляют лавровый лист, чабер, снижают температуру нагрева и выдерживают в шкафу еще 1 ч, часто поливая выделившимся соком.