Сельскохозяйственная биотехнология-стр.186

Рис. 3.16. Структура плазмиды pBR 322

синтеза нужного белка. Его количество может достигать 10% суммарного белка, синтезируемого бактериальной клеткой.

Эффективной экспрессии генов в составе плазмиды можно также достичь и за счет некоторых других мощных регулируемых промоторов, например: 1) Тгр-промотора триптофанового оперона, который регулируется репрессором и может регулироваться 3-индолилуксусной кислотой или триптофановым голоданием; 2) Ьас-промотора лактозного оперона, который также регулируется репрессором и может индуцироваться субстратом (лактозой); 3) гибридного trp-lac(tac)-np0M0T0pa, который регулируется 1ас-репрессором.

Последовательность Шайна - Дальгарно и расстояние от нее до инициирующего кодона существенным образом влияет на эффективность трансляции. Обычно эту последовательность включают в состав самого вектора вместе с инициирующим кодоном на нужном расстоянии. При экспрессии векторов такого типа образуется гибридный белок, в котором несколько N-koh-цевых аминокислотных остатков происходят от прокариотического гена - источника регуляторных элементов и инициирующего кодона. Гибридные белки часто более стабильны, а химическая или ферментативная обработка позволяет выделить эукариотическую часть белка.

На эффективность продуктивности рекомбинантной ДНК в существенной степени влияет число копий этой ДНК в расчете на клетку. Суммарная активность экспрессируемого гена растет с ростом копийности плазмиды. Таким образом, используя многокопийные плазмиды, можно достичь сверхсинтеза нужных белковых продуктов. Обычно используемые плазмидные векторы (pBR 322 и др.) поддерживаются в клетке в количестве 20-50 копий. Сейчас исследователи имеют в своем распоряжении температурно-чувствительные мутантные плазмиды, способные накопить до одной-двух тысяч копий на клетку, не нарушая ее жизненно важных функций. Таким образом можно достичь сверхпродукции плазмидных генов бактериальными штаммами-сверхпродуцентами. Это и представляет собой краеугольный камень биотехнологии, поскольку может давать существенный экономический эффект.

Другие материалы

НАЛИВКА ИЗ АБРИКОСОВ

На трехлитровую бутыль (банку): 2 кг очищенных абрикосов, 800 г сахара, 1 стакан кипяченой воды.

На десятилитровую бутыль (банку): 6 кг очищенных абрикосов, 2,4 кг сахара, 3 стакана кипяченой воды

Свежие, спелые плоды вымыть, удалить плодоножки, разломать пополам и вынуть косточки. Половинки абрикосов поместить в бутыль (банку), добавить сахар и воду или остывший сахарный сироп, сваренный из воды и сахара. Обвязав горлышко бутыли марлей, поставить ее в теплое место на 2-4 дня (до начала брожения). Как только появятся признаки брожения, марлю снять, установить водяной затвор и выдерживать в течение 20-30 дней до прекращения брожения. Полученную наливку слить и отфильтровать через полотно или через марлю и вату. Оставшиеся абрикосы отжать через ткань или марлю в 4-5 слоев. Полученную жидкость отфильтровать и добавить к наливке. Наливку разлить в бутылки и укупорить.