Сельскохозяйственная биотехнология-стр.186

Рис. 3.16. Структура плазмиды pBR 322

синтеза нужного белка. Его количество может достигать 10% суммарного белка, синтезируемого бактериальной клеткой.

Эффективной экспрессии генов в составе плазмиды можно также достичь и за счет некоторых других мощных регулируемых промоторов, например: 1) Тгр-промотора триптофанового оперона, который регулируется репрессором и может регулироваться 3-индолилуксусной кислотой или триптофановым голоданием; 2) Ьас-промотора лактозного оперона, который также регулируется репрессором и может индуцироваться субстратом (лактозой); 3) гибридного trp-lac(tac)-np0M0T0pa, который регулируется 1ас-репрессором.

Последовательность Шайна - Дальгарно и расстояние от нее до инициирующего кодона существенным образом влияет на эффективность трансляции. Обычно эту последовательность включают в состав самого вектора вместе с инициирующим кодоном на нужном расстоянии. При экспрессии векторов такого типа образуется гибридный белок, в котором несколько N-koh-цевых аминокислотных остатков происходят от прокариотического гена - источника регуляторных элементов и инициирующего кодона. Гибридные белки часто более стабильны, а химическая или ферментативная обработка позволяет выделить эукариотическую часть белка.

На эффективность продуктивности рекомбинантной ДНК в существенной степени влияет число копий этой ДНК в расчете на клетку. Суммарная активность экспрессируемого гена растет с ростом копийности плазмиды. Таким образом, используя многокопийные плазмиды, можно достичь сверхсинтеза нужных белковых продуктов. Обычно используемые плазмидные векторы (pBR 322 и др.) поддерживаются в клетке в количестве 20-50 копий. Сейчас исследователи имеют в своем распоряжении температурно-чувствительные мутантные плазмиды, способные накопить до одной-двух тысяч копий на клетку, не нарушая ее жизненно важных функций. Таким образом можно достичь сверхпродукции плазмидных генов бактериальными штаммами-сверхпродуцентами. Это и представляет собой краеугольный камень биотехнологии, поскольку может давать существенный экономический эффект.

Другие материалы

Консерванты в пищевой промышленности-стр.164

Биохимическое поведение. Эфиры и-оксибензойной кислоты быстро и полностью всасываются из желудочно-кишечного тракта и гидролизуются ] 101; поэтому накопления их в организме ожидать не следует. Выделение образующейся при гидролизе w-оксибензойной кислоты происходит через мочу. У крыс в течение 24 часов около 40% выделяется в виде самой кислоты, а 23% в виде я-окси-гиппуровой кислоты и её глюкуронового эфира. В крови обнаруживаются только незначительные количества w-оксибензойной кислоты ] 17].