Сельскохозяйственная биотехнология-стр.185

Однако удобнее встраивать ген в специальный вектор для экспрессии, который уже содержит регуляторные элементы, обеспечивающие активную экспрессию после введения рекомбинантной плазмиды в бактериальную клетку. К таким эффективным регуляторным участкам относится, например, сильный промотор гена Р-лактамазы (это ген устойчивости к ампициллину, входящий в состав плазмиды pBR 322). Ряд генов, в том числе и ген инсулина, встраивали в сайт рестрикции Pst 1, который расположен в структурной части гена. Промотор этого гена обеспечивает эффективную транскрипцию, которая продолжается до тех пор, пока РНК-полимераза не дойдет до сигнала терминации встроенного гена. В результате трансляции был получен химерный полипептид Р-лактамазаинсулин, из которого после удаления аминокислотной последовательности р-лактамазы удалось получить биологически активный инсулин.

Промотор гена р-лактамазы нерегулируемый, а использование таких промоторов не всегда удобно. Дело в том, что большое количество белка может блокировать рост бактерий. Кроме того, интенсивная транскрипция рекомбинантной ДНК может помешать репликации плазмиды, и она будет утрачена. Поэтому удобнее использовать регулируемые сильные промоторы, включение которых, а значит, и синтез чужеродного белка можно осуществить, когда получена большая бактериальная масса. К таким промоторам относится термочувствительный промотор рL, который ответствен за экспрессию нескольких генов бактериофага. Белок-репрессор, блокирующий действие этого промотора, активен при 31° С, но неактивен при 38° С. Таким образом, при инкубировании бактерий при 31° С чужеродный ген не экспрессируется. При повышении температуры pL-penpeccop инактивируется и наблюдается высокий уровень

Другие материалы

Консерванты в пищевой промышленности-стр.77

Для сохранения соков необходима концентрация углекислого газа 1,5%, что соответствует давлению примерно 7 атм при 15“С. Углекислота даже под давлением не убивает микроорганизмы, прежде всего дрожжи, а только замедляет их развитие. Микроорганизмы вполне сохраняют способность к некоторым ферментативным реакциям; например, дрожжи могут до известных пределов продуцировать спирт. Углекислый газ малоэффективен против молочнокислых бакте-

Таблица 13. Примеры газовых смесей, применяемых для некоторых продуктов, обработанных по МАР-гсхнологии |5|

Продукт