Сельскохозяйственная биотехнология-стр.184

Регуляция экспрессии у Е. coli происходит также и на уровне трансляции. Последовательность оснований длиной 6-8 нуклеотидов, расположенная непосредственно перед инициирующим кодоном АУГ, определяет эффективность трансляции. Эта последовательность представляет собой участок связывания мРНК с рибосомой. Как правило, он отстоит на 8 нуклеотидов от инициирующего кодона, и его сдвиг в ту или иную сторону может резко снижать эффективность трансляции соответствующей мРНК. Описанный участок называется последовательностью Шайна - Дальгарно, по имени исследователей, впервые его идентифицировавших.

Рис. 3.15. Сигналы инициации (а) и терминации (б) транскрипции у эукарнот

У эукариотических организмов механизм регуляции транскрипции гораздо более сложен. В результате клонирования и секвенирования генов эукариот обнаружены специфические последовательности, принимающие участие в транскрипции и трансляции. Эти последовательности по своей первичной структуре и расположению относительно инициирующего кодона отличаются от прокариотических, и бактериальная РНК-полимераза их не «узнает». Таким образом, для экспрессии эукариотических генов в клетках прокариот нужно, чтобы гены находились под контролем прокариотических регуляторных элементов. Это обстоятельство необходимо учитывать при конструировании векторов для экспрессии.

Экспрессируемые векторы. Экспрессия генов в бактериях. Для конструирования рекомбинантной ДНК, содержащей в своем составе ген, который должен экспрессироваться, придерживаются следующей стратегии. Синтезируют кДНК или из клонотеки выделяют клетки, несущие фрагмент генома с нужным геном, и клонируют их в соответствующем векторе. Фрагменты геномной ДНК подвергают модификации - удаляют из них некодирующие области и участки соседних генов. Часто для проведения этой операции необходимо секвенирование данного фрагмента ДНК. Затем конструируются промежуточные рекомбинантные ДНК, в которых ген помещается под контроль бактериальных регуляторных элементов (промотор, оператор, точка связывания с рибосомами). Эти регуляторные элементы выделяют специально для этой цели или из гибридных плазмид, сконструированных специально как источники регуляторных элементов. Полученная конструкция встраивается в подходящий вектор, например, pBR 322 (рис. 3.16), и ген экспрессируется в бактериальной клетке.

Другие материалы

Микробиологические основы технологии шампанизации вина-стр.126

В основу метода биологической деаэрации виноматериалов положена дыхательная функция дрожжей. В процессе деаэрации дрожжи используют кислород, содержащийся в субстрате, в ка честве дополнительного источника энергии. Молекулярный кислород, активируемый дыхательными ферментными системами клетки, участвует в окислении органических соединений. Дыхание является важнейшим источником образования промежуточных продуктов жизнедеятельности дрожжей, которые служат исходным материалом для обменных и биосинтетических процессов.