Сельскохозяйственная биотехнология-стр.175

Создание рекомбинантных молекул дало возможность анализа ДНК растений и животных. Теперь путем случайного

встраивания множества рестрикционных фрагментов ДНК в подходящие бактериальные плазмиды (эта процедура была названа «методом дробовика») можно с большой вероятностью получить клон, содержащий интересующий нас ген или какую-либо регуляторную последовательность. При этом нужно уметь из множества клонов отобрать интересующий исследователя.

Библиотека генов. Фаговые векторы. Косм иды.

«Метод дробовика» дает возможность получать библиотеки (или клоноте-ки) генов с целью выделения хромосомных генов. Оказалось, что гены эукариот занимают достаточно протяженные участки ДНК (до 10 тыс. нуклеотидных пар и более). Кроме того, для изучения регуляторных последовательностей, находящихся за пределами кодирующей части генов, необходимо клонировать еще более протяженные области генома. Оказалось, что для клонирования таких фрагментов плазмидные векторы не подходят. Дело в том, что плазмиды, содержащие большие вставки хромосомной ДНК, нестабильны и при репликации постепенно уменьшаются в размере в результате делеции все большего числа нуклеотидов чужеродной ДНК- Значит, при создании библиотеки емкость вектора играет существенную роль.

На основе бактериофага были сконструированы векторы, в составе которых фрагменты ДНК длиной до 20 тыс. н. п. весьма стабильны, т. е. их емкость достигает 20 килобаз (1 килобаз - 1000 нуклеотидных пар). При создании таких векторов учитывалось то обстоятельство, что вся центральная часть молекулы ДНК фага не нужна для репликации в Е. coli. Эту область с помощью рестриктазы вырезают из генома фага так, что правый и левый концевые фрагменты, необходимые для репликации, ос-

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.336

Общее время использования фильтра составляет 100-110 мин, что дает возможность пропускать варку за 2 часа, то есть оборачиваемость фильтр-пресса составляет 12 варок в сутки.

Мойка в конце рабочей недели В конце рабочей недели салфетки промываются без их извлечения. Целесообразно производить заполнение фильтра разбавленным щелочным раствором и многоступенчатую рециркуляцию этого раствора для растворепня частиц. Еще имеющиеся остатки загрязнений (дробина и частицы шлама) удаляются, а фильтр тщательно промывается водой.