Сельскохозяйственная биотехнология-стр.172

К векторной молекуле предъявляются следующие основные Требования:

1) она должна иметь область, чувствительную к определенной эндонуклеазе рестрикции, которая расщепляет вектор, как правило, в одном участке, превращая его кольцевую форму в линейную. К линейной ДНК «пришивают» ген или гены и затем снова замыкают ее в кольцо и рекомбинантную ДНК вводят в клетки;

2) вектор должен реплицироваться в определенных клетках. Репликация осуществляется посредством специфического уча стка ДНК-репликатора, где сосредоточен реплицирующий аппарат клетки и начинается репликация;

3) в составе векторной молекулы должен быть маркерный ген, который после проникновения вектора в клетку придает ей фенотип, свидетельствующий о присутствии вектора. Иными словами, вектор должен иметь селективный генетический при-знак. Часто в качестве селективных используют широко распространенные в природе гены ферментов, модифицирующих антибиотики и инактивирующие их действие. Например, в присутствии гена Р-лактамазы бактериальная клетка приобретает устойчивость к пенициллину и на среде с этим антибиотиком образует клон или колонию клеток, несущих данный ген, обычные клетки на данной среде погибают. Значит, если вектор содержит ген Р-лактамазы, то при помощи среды с антибиотиком легко обнаруживаются клетки, содержащие его, т. е. «трансформированные вектором».

Бактериальные плазмиды в качестве векторов для клонирования. Основная масса клеточной ДНК бактерий содержится в хромосоме (в хромосоме Е. coli, например, 4 млн. пар нуклеотидов). Однако кроме хромосом бактерии содержат большое число очень маленьких кольцевых молекул ДНК длиной несколько тысяч пар оснований. Такие минихромосомы называют плазмидами. Как правило, плазмиды имеют в своем составе гены устойчивости к антибиотикам. Эти гены находятся в плазмидах, а не в главной хромосоме, поскольку в этом случае они представлены гораздо большим числом копий. Высокая копий-ность плазмид обеспечивает клетке синтез большого количества ферментов, химически нейтрализующих антибиотики, что и обеспечивает устойчивость к последним.

Другие материалы

Микробиологические основы технологии шампанизации вина-стр.43

Органолептическая характеристика образцов шампанизированного вина, полученного на различных штаммах сухих дрожжей

Штамм дрожжей

Оценка, балл

Характеристика образца

1

No 96

9,15

Цвет светло-соломенный, букет чистый, свежий, гармоничный, вкус мягкий, гармоничный, типичный для шампанского. Пенистые и игристые свойства хорошо выражены

2

GVS 103

ОО