Сельскохозяйственная биотехнология-стр.172

К векторной молекуле предъявляются следующие основные Требования:

1) она должна иметь область, чувствительную к определенной эндонуклеазе рестрикции, которая расщепляет вектор, как правило, в одном участке, превращая его кольцевую форму в линейную. К линейной ДНК «пришивают» ген или гены и затем снова замыкают ее в кольцо и рекомбинантную ДНК вводят в клетки;

2) вектор должен реплицироваться в определенных клетках. Репликация осуществляется посредством специфического уча стка ДНК-репликатора, где сосредоточен реплицирующий аппарат клетки и начинается репликация;

3) в составе векторной молекулы должен быть маркерный ген, который после проникновения вектора в клетку придает ей фенотип, свидетельствующий о присутствии вектора. Иными словами, вектор должен иметь селективный генетический при-знак. Часто в качестве селективных используют широко распространенные в природе гены ферментов, модифицирующих антибиотики и инактивирующие их действие. Например, в присутствии гена Р-лактамазы бактериальная клетка приобретает устойчивость к пенициллину и на среде с этим антибиотиком образует клон или колонию клеток, несущих данный ген, обычные клетки на данной среде погибают. Значит, если вектор содержит ген Р-лактамазы, то при помощи среды с антибиотиком легко обнаруживаются клетки, содержащие его, т. е. «трансформированные вектором».

Бактериальные плазмиды в качестве векторов для клонирования. Основная масса клеточной ДНК бактерий содержится в хромосоме (в хромосоме Е. coli, например, 4 млн. пар нуклеотидов). Однако кроме хромосом бактерии содержат большое число очень маленьких кольцевых молекул ДНК длиной несколько тысяч пар оснований. Такие минихромосомы называют плазмидами. Как правило, плазмиды имеют в своем составе гены устойчивости к антибиотикам. Эти гены находятся в плазмидах, а не в главной хромосоме, поскольку в этом случае они представлены гораздо большим числом копий. Высокая копий-ность плазмид обеспечивает клетке синтез большого количества ферментов, химически нейтрализующих антибиотики, что и обеспечивает устойчивость к последним.

Другие материалы

ВИНО ИЗ ЯГОД БУЗИНЫ

Вариант 1

3 кг ягод бузины, 1 кг сахара, 3 л воды, 5 г лимонной кислоты, 4 гвоздики, кусочек корицы, дрожжи, 150 г изюма

Ягоды промыть, очистить от плодоножек и раздавить. Ягодную массу переложить в кастрюлю, добавить примерно 100 г сахара, лимонную кислоту, запарить 2 л кипятка и размешать. Кастрюлю поставить на огонь, довести смесь до кипения, добавить пряности и варить 15 минут. После охлаждения процедить жидкость через полотно, а ягодную массу отжать. Полученный сок перелить в бутыль, добавить раствор сахара (около 900 г сахара растворить в 1 л воды), подошедшие дрожжи и закрыть бутыль бродильной пробкой. После окончания брожения слить жидкость с осадка и снова оставить для брожения на короткое время. Когда брожение закончится, вино отфильтровать, разлить в бутылки и укупорить. Можно вместе с дрожжами добавить около 150 г изюма, а затем уже ставить сок на брожение.

Вариант 2

Сок из зрелых ягод бузины разбавить водой (в соотношении 1:2) и варить до уменьшения горечи. Затем на каждый литр жидкой смеси добавить 250 г сахара, 10 г лимонной кислоты и 0,3 г фосфорнокислого аммония. Поместить смесь в бутыль под водный затвор и выдерживать в комнатных условиях до прекращения выделения пузырьков газа, а затем процедить, отфильтровать и разлить в бутылки. Бутылки с вином хранить только горизонтально.