Сельскохозяйственная биотехнология-стр.171

Рис. 3.6. Использование переходника для соединения фрагментов с «разноименными» липкими концами обусловливают их экспрессию. Существуют линкеры «тупой конец- липкий конец».

При необходимости липкие концы можно превратить в тупые. Это достигается либо отщеплением липких концов с помощью фермента - эндонуклеазы S1, которая разрушает только одноцепочечную ДНК, либо липкие концы «застраивают», т. е. с помощью ДНК-полимеразы I на однонитиевых липких концах синтезируют вторую нить.

После того как ДНК сшита в пробирке, ее надо ввести в живые клетки, и тут возникает проблема вектора.

Векторные молекулы. Трансформация. Ключевой операцией в генетической инженерии является введение в клетку и стабильное поддержание генетической информации, содержащейся в рекомбинантных молекулах ДНК- Это достигается при помощи так называемых векторных молекул или векторов. Дело в том, что при обычном введении ДНК, например, в бактериальную клетку она, как правило, подвергается атаке ферментов, которые разлагают ее на составные компоненты - нуклеотиды. В некоторых случаях ДНК «выживает» в клетке, однако в процессе деления клеток она не наследуется и теряется. Для того чтобы рекомбинантная ДНК стала составной частью генетического аппарата клетки, она должна либо встроиться в ее геном (интегрироваться в хромосому) и реплицироваться за его счет, либо быть способной к автономной репликации.

Молекулы ДНК, способные акцептировать чужеродную ДНК и обеспечивающие ее репликацию, а может быть, и экспрессию, называются векторными молекулами. Таким образом, векторы позволяют осуществить введение в клетку дополнительной генетической информации. В качестве векторов используют, как правило, плазмиды, бактериофаги, мобильные элементы, вирусы животных. Первые плазмиды-векторы были выделены из бактерий; в последующем большинство векторов было сконструировано при помощи методов генетической инженерии в соответствии с задачами экспериментаторов.

Другие материалы

Технология солода и пива-стр.450

Достаточным считается наличие свободного а-аминного азота (FAN) в количестве 200-230 мг/л (в пересчете на 12%-ное сусло). Эта величина всегда достигается при работе с хорошо растворенным солодом; сусло же, полученное с применением несоложеного зерна или сахара, требует контроля и особого к себе отношения (например, более длительной белковой паузы при затирании). Потребление аминокислот из сусла происходит сквозь белки пор клеточной стенки.