Сельскохозяйственная биотехнология-стр.166

Один из методов основан на химической деградации ДНК. Он был предложен в 1977 г. Максамом и Гилбертом и назван их именем (рис. 3.3). Суть метода сводится к следующему: один из концов фрагмента ДНК метят с помощью изотопа фосфора Р; препарат меченой ДНК делят на четыре порции и каждую обрабатывают реагентом, специфически разрушающим одно или два из четырех оснований. Условия реакции подбирают таким образом, чтобы на каждую молекулу ДНК приходилось лишь несколько повреждений. При обработке поврежденных молекул пиперидином в ДНК образуется разрыв в том месте,

Рис. 3.3. Схема эксперимента по секвенированию ДНК (по Сэнгеру) (а) и р диоавтограмма, получеииая в результате эксперимента (б)

где находилось разрушенное основание. В результате получается набор меченых фрагментов, длины которых определяются расстоянием от разрушенного основания до конца молекулы. Фрагменты, образовавшиеся во всех четырех реакциях, подвергают электрофорезу в четырех соседних дорожках; затем проводят радиоавтографию, и фрагменты, содержащие радиоактивную метку, оставляют отпечатки на рентгеновской пленке. По положению отпечатков можно определить, на каком расстоянии от меченого конца находилось разрушенное основание, а зная это основание- его положение. Так набор полос на рентгеновской пленке определяет нуклеотидную последовательность ДНК.

С помощью этого метода за короткий срок удалось установить полную нуклеотидную последовательность ДНК SW 40, а также последовательность рекомбинантной плазмиды pBR 322, о которой речь пойдет ниже.

Другой метод, разработанный Сэн-гером и названный его именем, основан не на химическом, а на ферментативном подходе. Ферменты, синтезирующие ДНК, называют ДНК-полимеразами. Они катализируют образование ДНК только в присутствии предсуще-ствующих ДНК-матриц, и нуклеотидная последовательность новосинтезированных цепей ДНК комплементарна последовательности матриц.

Другие материалы

Пищевая химия-стр.109

Так как белковые вещества сырья (муки, крупы, молока, мяса), включая ферменты, часто являются определяющими в обеспечении качества пищевых изделий, то для изучения физико-химических, биохимических и физиологических свойств этих соединений обязательным условием является получение белков в индивидуальном и, по возможности, недена-турированном состоянии. Белки обычно теряют природные (нативные)