Сельскохозяйственная биотехнология-стр.166

Один из методов основан на химической деградации ДНК. Он был предложен в 1977 г. Максамом и Гилбертом и назван их именем (рис. 3.3). Суть метода сводится к следующему: один из концов фрагмента ДНК метят с помощью изотопа фосфора Р; препарат меченой ДНК делят на четыре порции и каждую обрабатывают реагентом, специфически разрушающим одно или два из четырех оснований. Условия реакции подбирают таким образом, чтобы на каждую молекулу ДНК приходилось лишь несколько повреждений. При обработке поврежденных молекул пиперидином в ДНК образуется разрыв в том месте,

Рис. 3.3. Схема эксперимента по секвенированию ДНК (по Сэнгеру) (а) и р диоавтограмма, получеииая в результате эксперимента (б)

где находилось разрушенное основание. В результате получается набор меченых фрагментов, длины которых определяются расстоянием от разрушенного основания до конца молекулы. Фрагменты, образовавшиеся во всех четырех реакциях, подвергают электрофорезу в четырех соседних дорожках; затем проводят радиоавтографию, и фрагменты, содержащие радиоактивную метку, оставляют отпечатки на рентгеновской пленке. По положению отпечатков можно определить, на каком расстоянии от меченого конца находилось разрушенное основание, а зная это основание- его положение. Так набор полос на рентгеновской пленке определяет нуклеотидную последовательность ДНК.

С помощью этого метода за короткий срок удалось установить полную нуклеотидную последовательность ДНК SW 40, а также последовательность рекомбинантной плазмиды pBR 322, о которой речь пойдет ниже.

Другой метод, разработанный Сэн-гером и названный его именем, основан не на химическом, а на ферментативном подходе. Ферменты, синтезирующие ДНК, называют ДНК-полимеразами. Они катализируют образование ДНК только в присутствии предсуще-ствующих ДНК-матриц, и нуклеотидная последовательность новосинтезированных цепей ДНК комплементарна последовательности матриц.

Другие материалы

Технология спирта-стр.118

Одновременно с началом выгрузки картофеля из предразвар-ника в разварник осторожно пускают пар. По окончании загрузки плотно закрывают люк разварника. В начале варки в течение

5...7 мин картофель прогревают при открытом циркуляционном вентиле для вытеснения воздуха. Затем, закрыв циркуляционный вентиль, в течение 10... 12 мин поднимают давление в разварнике до 0,35...0,4 МПа, что соответствует температуре 147...151 °С, и при этом давлении картофель разваривают до светло-коричневого цвета с зеленоватым оттенком, после чего выдувают массу в выдерживатель.