Сельскохозяйственная биотехнология-стр.164

Если вышеупомянутую процедуру проделать в растворе, то разделения достигнуть не удастся. Поэтому гель-электрофорез осуществляют в носителе, которым служит гель-концентрирован-ный раствор полимера. Отсюда и название метода. Гель образует трехмерную полимерную сеть, ячейки которой заполнены растворителем. Эта сеть придает конструкции жесткость и составляет по массе лишь несколько процентов геля. Таким образом, использование геля в качестве среды, где проводится электрофорез, позволило решить проблему разделения фрагментов ДНК-

Короткие фрагменты мигрируют намного быстрее, чем длинные. При сравнительно высокой концентрации агарозы большие фрагменты вообще не могут проникнуть в гель. В процессе миграции рестрикционные фрагменты не деградируют, их можно элюировать (вымывать) в виде биологически активных двуцепочечных молекул. При окрашивании гелей красителями, связывающимися с ДНК, выявляется набор полос, каждая из которых отвечает рестрикционному фрагменту, молекулярную массу которого можно определить, проведя калибровку с помощью ДНК с известными молекулярными массами (рис. 3.1).

Использование электрофореза для разделения рестрикционных фрагментов дает возможность получать рестрикционные карты. Первая карта была получена для вируса SW 40 (обезьяний вирус, вызывающий злокачественную трансформацию), содержащего 5423 пары оснований (рис. 3.2). Использовали ре-стриктазу Hindll, расщепляющую кольцевую ДНК вируса на

11 фрагментов. Порядок их расположения в ДНК был установлен путем исследования наборов фрагментов, образующихся по мере того, как расщепление доходит до конца. Первый разрыв превращал кольцевую молекулу в линейную, которая затем расщеплялась на все меньшие фрагменты. Исследовали вначале наборы перекрывающихся фрагментов, а затем продукты полного расщепления. Таким образом была получена рестрикционная карта кольцевой вирусной ДНК, на которую были нанесены сайты расщепления рестриктазой. Повторив подобные эксперименты с другой рестриктазой, можно получить более подробную карту, где отмечено много сайтов рестрикции.

Другие материалы

Технология производства продукции общественного питания-стр.253

Набухание может быть ограниченным (набухшее вещество остается в состоянии геля) и неограниченным (вещество после набухание переходит в раствор). При повышении температуры ограниченное состояние нередко переходит в неограниченное. Так, желатин при температуре 20 ... 22 °С набухает ограниченно, а при более высокой - неограниченно (растворяется практически полностью).