Пищевая химия-стр.323

Влияние иммобилизации на ферментативную активность. Иммобилизация часто приводит к резким изменениям основных параметров ферментативной реакции: максимальной скорости (Vmax); константы Ми-хаэлиса (К ); оптимума pH и температуры, а также отношения к ингибиторам.

Степень и природа этих изменений зависят не только от используемого метода иммобилизации, но и от типа ферментативной реакции. Большое влияние на ферментативную активность может оказывать полимерная матрица, причем это влияние может проявляться как в виде воздействия на микроокружение фермента, так и непосредственно на саму молекулу фермента. Кроме того, сами условия иммобилизации (значение pH, присутствие свободных радикалов, окисляющих агентов и т. п.) могут приводить к частичной или полной инактивации фермента.

При рассмотрении влияния иммобилизации на ферментативную активность одним из важных является вопрос об эффективных кинетических параметрах.

Параметры Кти Vmix, используемые для характеристики каталитических свойств ферментов в разбавленных растворах (см. разд. 8.2), не могут быть применены в их строгом математическом значении для характеристики иммобилизованных ферментов, т. к. наблюдаются существенные отклонения от гиперболической субстратной кривой, описываемой уравнением Михаэлиса- Ментен, и искривления прямолинейных графиков в двойных обратных координатах (уравнение Лайнуивера-Берка).

Таблица 8.4. Иммобилизация некоторых ферментов известными методами [М. Е. Бекер. Введение в биотехнологию, 1978]

Метод иммобилизации

Шифр фермента

Наименование

Адсорбция или ионный обмен

1.11.1.6

Катал аза

3.2.1.21

Р-Глюкозидаза

3.2.1.26

Инвертаза

3.4.23.1

Пепсин

3.4.21.4

Трипсин

Влючение в гель (полиакриламидный)

3.5.1.1

Аспарагиназа

1.1.1.27

Лактатдегидрогеназа

1.1.3.4

Глкжозооксидаза

1.11.1.7

Пероксидаза

3.2.1.1

а-Амилаза

3.2.1.2

р-Амилаза

Поперечная пришивка фермента к носителю

3.2.21.4

Трипсин

Прикрепление фермента к носителю

1.1.1.27

Лактатдегидрогеназа

ковалентной связью

1.1.3.4

Гл юкозооксидаза

Азидным методом

1.11.1.7

Пероксидаза

3.4.21.4

Трипсин

Карбоимидным методом

3.2.1.26

Инвертаза

3.4.21.4

Трипсин

3.5.1.1

Аспарагиназа

Бромциан-методом

1.1.3.4

Глкжозооксидаза

1.11.1.7

Пероксидаза

3.4.21.4

Трипсин

Методом диазотирования

3.1.1.7

Ацетилхолинэстераза

3.1.1.8

Холинэстераза

3.5.1.1

Аспарагиназа

1.1.3.4

Глкжозооксидаза

Изотиооиатный метод

1.11.1.6

Катал аза

1.11.1.7

Пероксидаза

3.2.1.1

а-Амилаза

3.4.21.4

Трипсин

3.2.1.2

р-Амилаза

По этой причине в случае иммобилизованных ферментов лучше заново определить физический смысл данных кинетических параметров. Ранее с этой целью использовался параметр «кажущаяся» Кт, но позднее было предложено пользоваться двумя константами: Kw и V .

Другие материалы

Строение молочной железы

Степень развития и строение молочной железы — важнейшие условия, обусловливающие уровень молочной продуктивности. Вымя коровы представляет собой молочную железу, состоящую из четырех самостоятельных долей (четвертей), не соединяющихся между собой протоками. Молоко из каждой четверти вымени может быть выделено только через свой выводной проток и сосок этой доли. Правая и левая половины вымени разделены толстой соединительной перегородкой, а передняя и задняя — тонкой. Задние доли чаше всего лучше развиты, чем передние. Вымя покрыто тонкой кожей с редким волосом.