Люминесцентная микроскопия. Принцип люминесцентной микроскопии основан на способности микроорганизмов светиться под влиянием падающего на них света. Люминесценцию можно наблюдать с помощью обычного микроскопа, установив на пути яркого источника света светофильтр, пропускающий сине-фиолетовые лучи, вызывающие люминесценцию частей препарата, способных светиться. Синий свет, возбуждающий эту люминесценцию, значительно ярче ее самой; поэтому, чтобы поле зрения не засвечивалось, используют дополнительный желтый светофильтр. Для микробиологических исследований выпускаются специальные люминесцентные микроскопы.

Препараты микроорганизмов можно обработать специальными красителями - флуорохромами, получив вторичную флуоресценцию, т.е. способность клеток или отдельных органелл ярко светиться.

Люминесцентная микроскопия применяется для выявления живых и мертвых клеток микроорганизмов, изучения их строения [2, 323]. Флуорохром свободно проникает внутрь клетки, придавая клеточным органеллам характерное свечение. Наиболее пригодными для прижизненной обработки микроорганизмов являются следующие флуорохромы:

- примулин, с помощью которого различают живые и мертвые клетки (у живых клеток светится только оболочка, мертвые ярко светятся);

- акридиновый оранжевый, связываясь с белками протоплазмы, придает им темно-зеленое свечение;

- аурофосфин аккумулируется митохондриями, ярко светящимися золотистым светом.

8.4.5. Определение количества клеток

Количественный учет микроорганизмов необходим при микробиологическом контроле технологических процессов, санитарно-гигиеническом контроле производства и идентификации микроорганизмов, выделенных из производственных субстратов.